大家好,本篇文章为大家解答以上问题,相信很多人对多聚甲醛固定液配制都不是特别的了解,因此呢,今天就来为大家分享下关于多聚甲醛固定液配制以及多聚甲醛组织固定液怎么配置的问题知识,还望可以帮助大家,解决大家的一些困惑,下面一起来看看吧!
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4%多聚甲醛怎么配
4%多聚甲醛怎么配
4%多聚甲醛是常用固定液,4%指的是最终的质量体积比,因此,应该是定容至1 L。如果加液1 L,40 g PFA溶入后体积稍有增加,得到的实际浓度略小于4%,但固定液的浓度要求并不是非常精确,这点浓度变化常常不会对固定效果产生影响。
多聚甲醛(Paraformalclehyde)又称固体甲醛,是一类线型短链的聚氧甲撑二醇HO(CH2O)nH(式中的n=8–100)混合物,其中还含有少量水份和甲醇。多聚甲醛性状为甲醛的固体聚合物。白色无定型粉末,有辛辣气味。
其配制方法如下:
(1)4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3)
试剂:多聚甲醛 40g
0.1mol/L磷酸缓冲液 至1000ml
配制方法:称取40g多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液(Phosphate Buffer以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末*溶解,通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮,zui后补足0.1mol/L的PB于1000ml,充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较*保存。
(2)4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢yang化钠
试剂:A液:多聚甲醛 40g
蒸馏水 400ml
B液:Na2HPO4·2H2O 16.88g
蒸馏水 300ml
C液:NaOH 3.86g
蒸馏水 200m
配制方法:A液在500ml的三角烧瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛*溶解后冷却待用。注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后,将B液倒入C液中,混合后再加入A液,以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2~7.4,zui后,补充蒸馏水至1000ml充分混合,4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究,用于免疫电镜时,加入少量新鲜配制的戊二醛,使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和,适于组织的*保存。组织标本于该固定液中,4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
2.5%戊二醛和4%多聚甲醛固定液比例
2.5%戊二醛和4%多聚甲醛固定液要4%多聚甲醛+(0.5-2%)戊二醛。要灌注固定,即选择4%多聚甲醛+(0.5-2%)戊二醛的混合固定液,这两种固定剂优缺点可以互相补充。多聚甲醛与戊二醛相比,其渗透力强、固定迅速、价格低。